原位kaiyun官方网站体育監測注射疫苗在注射器中的蛋白質聚集

更新時間：2021-12-10 點擊次數：1621

　　注射用生物製藥產品中蛋白質和活性成分(API)的聚集仍然是影響產品穩定性和可用性的主要問題。蛋白質聚集可以發生在蛋白質治療藥物生命周期的所有階段，包括表達，複性，純化，滅菌，運輸，儲存和遞送過程。大家都知道，蛋白質聚集的機製尚不清楚，但是在某些製造階段會增加物理降解和聚集體形成的風險，例如配方組成，細胞培養過程中的微生物或藥瓶汙染物的影響，以及藥物儲存過程中存在的化學降解可能。特別是已經證明，儲存容器的環境起著類似於預填充注射器的作用，例如，從橡膠塞中漏出的矽油和玻璃分層會誘發聚集。在國際上對生物製藥產品控製的衛生法規越來越嚴格的背景下，在生產和儲存過程中，對治療性蛋白質藥物的變性和降解過程進行原位監測，對生產商和研究人員來說是一個關鍵的競爭優勢

為了解決此類應用，法國Cordouan 公司開發了命名為 VASCO Kin 原位kaiyun官方网站体育(見下圖)，該分析儀基於實時原位非接觸式遠程DLS測量。DLS是膠體科學和蛋白質表征研究中普遍采用的技術之一，它是基於對粒子布朗運動引起的散射光波動分析的成熟且非常強大的技術[4] 。它可以在一分鍾內精確測量從 0.5nm 到 10um 的顆粒粒度。盡管當今商用DLS係統提供了不同的測量配置，但它們都要求用戶取樣，稀釋，轉移到樣品池中，這些操作都可能會影響樣品蛋白質的聚集狀態。

原位kaiyun官方网站体育VASCO Kin 是一種靈活的DLS係統，這得益於其*的光纖遠程探頭(OFRP)，使傳統DLS的限製問題迎刃而解。 OFRP是一個經過優化的，高度耐用的光學機械組件，可以在無需對樣品分批處理的情況下進行直接的、非接觸的測量。通過特殊的光纖連接到光學單元，OFRP將激光束射入樣品中，並以 170°的角度向後收集樣品的散射光(見下圖)。連接配備專用快速采集電子電路的高靈敏度單光子雪崩光電二極管檢測器(APD)，實時監控散射光強度的波動，並通過強大的數學算法將其轉換為時間分辨的粒度動力學分析。

　　為了證明 原位kaiyun官方网站体育VASCO Kin 實現在注射器中非接觸原位測量的能力，我們對一種商用可注射流感疫苗進行了一係列粒徑測量(見圖 1-左)。這種疫苗是一種複雜的培養基，由多種不同成分混合而成：來自三種不同幹細胞的去活化和碎片化的病毒，和包括 ppi 水(質子泵抑製劑)、氯化鉀、氯化鈉、生理鹽水緩衝液和微量的雞蛋蛋白(卵清蛋白)、甲醛、新黴素、辛醇 9 等幾種賦形劑。為了進行測量，從塑料包裝 1 中取出疫苗注射器(見圖 1)，並將其放置在距離Kin遠程探頭6cm 處的專用支架上(見圖 1-右)。

　　進一步的實驗表明，即使不去除塑料透明包裝進行測量，結果與去除包裝的結果也非常一致。

　　為了比較和證明這種疫苗的老化效應，我們將兩支疫苗分別儲存在 7℃的冰箱中和保存在室溫下。各儲存8個月後，在相同的條件下測量了兩個疫苗。其粒度分布結果如下圖所示

　　
對於儲存在冰箱中的疫苗(圖 2 左)，可以注意到樣品的粒度分布相對複雜，顯示了從30 nm到800nm 的三個峰值。這些峰值分別對應病毒片段和蛋白質。另外，還有粒度超過 10µm 的團聚體存在。相比之下(圖 2 右)，該疫苗儲存在室溫下清楚地顯示了一些明顯的粒度分布的變化。現在看來像是一個從 10nm到10µm廣泛的連續分布。上述結果第一次證明了原位 DLS 測量注射器內樣品的有效性和準確性，並為進一步研究所發生的粒度變化機理奠定了基礎

　　用原位kaiyun官方网站体育VASCO Kin 進行非接觸式原位直接測量注射疫苗的納米粒徑及其分布，這具有創新性的意義。它不僅省去了樣品的前處理步驟，節約了比色皿等耗材，而且為該納米粒度測量係統現場監測生物製藥產品中蛋白質聚集的情況開辟了新的應用領域。VASCO Kin 還可以用於在各種類型的反應器配置耦合[6](雙夾套玻璃反應器，高壓和高溫超臨界 CO2高壓釜，微波反應器，微流體芯片等)中實時監控納米粒子合成動力學。

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